Метилзависимая сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза BlsI узнаёт и расщепляет последовательность ДНК 5’-RYNRY-3’ при наличии в ней не менее двух 5-метилцитозинов
Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова, Т. 9 , № 2 ,с. 30-38, 2013
Изучена субстратная специфичность метилзависимой сайт-специфической ДНК-эндонуклеазы BlsI. Показано, что BlsI гидролизует вырожденную последовательность ДНК 5’-RYNRY-3’ (где R – A или G, а Y – T или C) при наличии в ней двух или более 5-метилцитозинов. Эффективность гидролиза ДНК ферментом зависит от числа 5-метилцитозинов и их положения в узнаваемой последовательности. Поскольку эндонуклеаза BlsI расщепляет только С5-метилированную ДНК, она может быть использована в молекулярно-биологических и эпигенетических исследованиях для оценки метилирования геномной ДНК эукариот.
Новая метилзависимая сайт-специфическая ДНК- эндонуклеаза MteI расщепляет последовательность 5’-G(5mC)G(5mC)NG(5mC)GC-3’/3’-CG(5mC)GN(5mC)G(5mC)G-5’
Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2012. – Т. 8 – № 1 – С. 16 - 26
Новая метилзависимая сайт-специфическая ДНК-эндонуклеаза MteI выделена из штамма бактерии Microbacterium testaceum 17B. Фермент узнает С5-метилированную последовательность ДНК и не гидролизует неметилированную ДНК. MteI является первой из метилзависимых сайт-специфических ДНК-эндонуклеаз, узнающих протяженный сайт, при этом активность фермента зависит от числа 5-метилцитозинов и их положения в узнаваемой последовательности. MteI расщепляет сайт 5’-G(5mC)G(5mC)↑NG(5mC)GC-3’/3’-CG(5mC)GN↓(5mC)G(5mC)G-5’ как указано стрелками и эта последовательность является минимальным сайтом узнавания. Активность фермента существенно возрастает при замене в минимальном сайте узнавания 5’-GC-3’ динуклеотидов на 5’-G(5mC)-3’ динуклеотиды и появлении дополнительных 5’-G(5mC)-3’ динуклеотидов на 5'-концах нонануклеотида в обеих цепях ДНК. Благодаря своей способности расщеплять только протяженные метилированные последовательности ДНК фермент MteI может найти практическое применение в молекулярно-биологических и эпигенетических работах.
Новая сайт-специфическая метилзависимая ДНК эндонуклеаза PkrI узнаёт и расщепляет метилированную последовательность 5'-GCN^GC-3'/3'-CG^NCG-5', содержащую не менее 3-х 5-метилцитозинов
Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю. А. Овчинникова. – 2011. – Т. 7 – № 3 – С. 35 - 42
Из штамма бактерии Planomicrobium koreense 78k выделена новая сайт-специфическая метилзависимая ДНК эндонуклеаза PkrI, узнающая и расщепляющая как указано стрелкой метилированную последовательность ДНК 5'-GCN↑GC-3’/3’-CG↓NCG-5’ при наличии в ней не менее трёх 5-метилцитозинов и не расщепляющая неметилированную ДНК. Благодаря своей способности расщеплять только метилированную ДНК фермент PkrI может найти практическое применение в молекулярно-биологических работах, в частности, для определения статуса метилирования ДНК эукариот.
Самые читаемые
Последние материалы
- GlaI-ПЦР-анализ в режиме реального времени регуляторных областей генов HDAC4, RARB and URB1 человека
- Применение метода GLAD-ПЦР анализа для выявления сайтов метилирования в регуляторных областях генов-онкосупрессоров ELMO1 и ESR1 при колоректальном раке
- Клонирование системы рестрикции-модификации BpuN4I из Bacillus Pumilus N4
- MteI-ПЦР анализ – новый метод определения статуса метилирования GC-богатых регуляторных участков генов-онкосупрессоров человека
- Новая сайт-специфическая эндонуклеаза рестрикции BpuN4I узнает и расщепляет последовательность ДНК 5’-G^GNNCC-3’